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轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素

日期:2021-10-20瀏覽:1900次

轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體

肌側(cè)索硬化蛋白2抗體

磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

酰基輔酶A脫氫酶長(zhǎng)鏈抗體

細(xì)胞分裂周期蛋白5抗體

β淀粉樣肽/Aβ42抗體

ADCK4蛋白抗體

抑癌蛋白AIMP3抗體

蛋白激酶A錨定蛋白6抗體

肺α/β水解酶蛋白1抗體

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14B抗體

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體

肺α/β水解酶蛋白3抗體

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A亞基5抗體

ADCK1蛋白抗體

?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體

α/β水解酶4抗體

ADCK2蛋白抗體

乙醛脫氫酶16家庭A1抗體

粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

乙醇脫氫酶1抗體

δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體

肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體

α2巨球蛋白(α-2M)抗體

ACCSL蛋白抗體

甲胎蛋白抗體

β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體

星形肌動(dòng)蛋白抗體

系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體


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